大腸桿菌化學感受態(tài)細胞表達分析
簡要描述：
大腸桿菌化學感受態(tài)細胞表達分析BL21-AI菌株來源于BL21菌株，是一種大腸桿菌B/r菌株（E. Coli B/r）。含有一個染色體整合的編碼T7 RNA聚合酶（T7 RNAP）的基因到araBAD操縱子的araB位點，通過操控araBAD啟動子來調節(jié)T7 RNA聚合酶的表達。
產(chǎn)品時間：2024-12-16
打印當前頁BL21-AI Chemically Competent Cell 大腸桿菌化學感受態(tài)細胞
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產(chǎn)品標簽：
BL21 Star (DE3) pLysS；Rosetta (DE3)；BL21 (DE3)；表達感受態(tài)細胞；pET表達載體；IPTG誘導；非毒性蛋白表達；
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貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 價格（元） |
MF2336-1000UL | BL21-AI Chemically Competent Cell 大腸桿菌化學感受態(tài)細胞 | 10×100μl | 450 |
MF2336-5000UL | BL21-AI Chemically Competent Cell 大腸桿菌化學感受態(tài)細胞 | 50×100μl | 1880 |
【好消息】：見我司整理的BL21系列表達感受態(tài)細胞常見問題。
產(chǎn)品組分：
組分編號 | 組分名稱 | 貨號（規(guī)格） | |
MF2336-1000UL | MF2336-5000UL | ||
MF2336-A | BL21-AI Competent Cell | 10×100μl | 50×100μl |
MF2336-B | Control Plasmid puC19, 10pg/μl | 10μl | 10μl |
菌株描述
BL21-AI菌株來源于BL21菌株，是一種大腸桿菌B/r菌株（E. Coli B/r）。含有一個染色體整合的編碼T7 RNA聚合酶（T7 RNAP）的基因到araBAD操縱子的araB位點，通過操控araBAD啟動子來調節(jié)T7 RNA聚合酶的表達。此菌株已經(jīng)敲除araB基因。tetA基因賦予四環(huán)素抗性，允許用四環(huán)素來驗證菌株。
由于T7 RNAP基因位于araBAD操縱子的araB位點，因此，可通過糖類（L-阿拉伯糖和葡萄糖）來調節(jié)T7 RNA聚合酶的表達。在培養(yǎng)基內加入L-阿拉伯糖，能夠誘導araBAD啟動子下游T7 RNA聚合酶表達，進而促進目的蛋白表達；而在培養(yǎng)基加入葡萄糖，能夠抑制araBAD啟動子下游T7 RNA聚合酶表達，進而抑制目的蛋白表達。BL21-AI菌株適用于任何以T7啟動子為基礎的表達載體，進行高水平的重組蛋白表達。由于T7 RNA聚合酶的表達水平能被高度調控，該菌株特別適用于表達對其他BL21菌株有毒或抑制生長的蛋白。
BL21-AI菌株缺乏lon蛋白酶和外膜蛋白酶OmpT的基因，這兩種酶的缺失能夠降低外源重組蛋白在菌體內的降解，從而增加了蛋白表達量。最終，BL21-AI菌株表達所得的重組蛋白產(chǎn)量與其他BL21菌株相近。
BL21-AI菌株基因型：F-ompT hsdSB (rB-mB-) gal dcm araB::T7RNAP-tetA
需求條件
建議在以下幾個情況下選擇BL21-AI菌株來表達您的目的基因：
a） 正在使用T7啟動子為基礎的表達載體（高拷貝或低拷貝皆可）
b） 當使用其他BL21菌株發(fā)現(xiàn)生長抑制現(xiàn)象（比如毒性）
c） 正要表達一種已知的毒性蛋白
產(chǎn)品描述
本品是大腸桿菌BL21-AI菌株經(jīng)特殊工藝制作所得的感受態(tài)細胞，可用于DNA的熱激轉化。特別適合任何以T7啟動子為基礎的表達載體系統(tǒng)，且要求嚴格調控和大量表達毒性蛋白的應用。經(jīng)pUC19質粒檢測轉化效率可達108 cfu/μg DNA。且在-80℃能穩(wěn)定保存幾個月轉化效率不發(fā)生改變。
保存與運輸條件：
保存：-80℃保存，六個月有效。
運輸：干冰運輸。
注意事項
1） 感受態(tài)細胞必須用干冰運輸。感受態(tài)細胞應在-80℃保存，不可反復凍融且放置時間過長，否則會減低感受態(tài)細胞的轉化效率。
2） 最好在冰上融化感受態(tài)細胞。
3） 進行轉化操作時，需在相應溫度及無菌條件下進行。
4） 為防止轉化實驗不成功，可保留部分連接反應液以重新轉化，將損失降到zui低。
5） 產(chǎn)品包裝內含質粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供對照實驗用。
6） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用方法【所有操作均在無菌條件的標準下進行】
1） 從-80℃冰箱取出取感受態(tài)細胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌塊融化，加入目的DNA，用手輕彈管底輕輕混勻，冰浴靜置25min。
2） 42℃熱激45s，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3min。此過程不要搖動離心管。
3） 向每個離心管中加700 μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃ 搖床，200 rpm振蕩培養(yǎng)60min，目的使質粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。
4） 低速離心收菌（比如4000rpm，2min），留取100μl左右上清，用槍輕輕吹打重懸菌塊，之后加到含相應抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于室溫（或37℃）直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16h。
【注意】：
a）涂布用量可根據(jù)具體實驗調整。若轉化的DNA總量較多，可不用離心，直接取少量轉化產(chǎn)物涂布平板；反之，若轉化的DNA總量較少，則通過離心（4,000 rpm，2min）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。
b）新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。
c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數(shù)過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。
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名稱 | 規(guī)格 | |
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MS0023-25G | Streptomycin Sulfate, USP Grade硫酸鏈mei素 | 25g |
MS0021-10G | Chloramphenicol, USP Grade氯mei素 | 10g |
MS0018-10G | Ampicillin, Sodium Salt氨芐青mei素鈉 | 10g |
MS0017-5G | Carbenicillin, Disodium Salt羧芐青mei素二鈉鹽 | 5g |
MS0019-10G | Kanamycin Sulfate硫酸卡那mei素 | 10g |
MS0014-1G | Rifampicin, USP Grade利fu平 | 1g |
— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信"的經(jīng)營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質產(chǎn)品。
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